【卡梅德生物】通过单B细胞技术制备兔单抗出现的问题及如何解决？

川长思鸟来 2024-05-24 12:38 40阅读 0赞

在制备[兔单抗][Link 1]的过程中，可能会遇到一些常见问题，以下是一些可能的问题和相应的解决方法：

1.兔单抗的特异性不足是什么导致的？

抗体如果发生了与非目标蛋白的结合，那么可能导致抗体的特异性不足。发生这种情况可以重新评估抗原选择，优化抗原的纯度和质量，调整免疫方案以提高特异性\[1\]。

2.用流式可以一次分选多少个抗原特异性的单个B细胞？

目前，FACS法的通量是一天可以分选10板抗原特异性的单B细胞。

3.抗体的产量低该怎么办？

如出现抗体产量低的情况，可以调整免疫方案，适当增加免疫次数，也可以使用强化的免疫佐剂。

4.抗体亲和力低怎么办？

如出现抗体亲和力低的情况，可以调整免疫方案，重新评估抗原选择，也可以通过亲和纯化步骤来提高亲和力

5.FACS分选单B细胞，除特异性抗原标记外，还需要其他什么surface marker染色？

小鼠B细胞可以用CD19作为表面marker，然后通过IgG阳性，IgM阴性来分选单细胞。兔子B细胞的表面marker目前信息比较少，分选的时候可以先根据物理参数，比如大小、颗粒度进行分选，然后再根据IgG阳性IgM阴性以及抗原特异性上进行分选\[2\]。

6.培养的记忆B细胞可以分泌抗体吗？需要先增殖后分化成浆细胞吗？

是的，记忆B细胞需要分化成终端的浆细胞，才能分泌抗体\[3\]。

7.用单个B细胞技术制备抗体，记忆B细胞和浆细胞哪种细胞更有优势？

两种细胞各有优势，记忆B细胞抗体基因拷贝数较低但在B细胞中的比例比浆细胞高。浆细胞在B细胞中的比例很低，但每个细胞含有抗体基因的拷贝数相对较高。

[卡梅德生物][Link 2]单B细胞单抗制备（single b）基于[流式细胞分选][Link 3]技术，利用每个B细胞只产生一种特异性抗体的特性，直接从单个B细胞中扩增出抗体基因，通过重组表达获得特异性抗体。基于[单B细胞技术][B]，可以在完成动物免疫后直接从外周血中获取阳性B细胞并克隆抗体基因序列，得到的兔单克隆抗体具有高特异性、高活性和高亲和力等突出优势。为了满足客户的不同需求，卡梅德生物能够提供从抗原设计，合成与修饰，到动物免疫，单B细胞富集筛选，表达与纯化，功能验证等一站式技术服务。更多详情可咨询卡梅德生物官网获得详细内容：

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参考文献

\[1\]Gross A, Schoendube J, Zimmermann S, et al. Technologies for Single-Cell Isolation. Int J Mol Sci. 2015;16(8):16897-16919.

\[2\]\[2\] Wallace J L , Arfors K E , Mcknight G W .A monoclonal antibody against the CD18 leukocyte adhesion molecule prevents indomethacin-induced gastric damage in the rabbit\[J\].Gastroenterology, 1991, 100(4):878-883.DOI:10.1016/0016-5085(91)90259-N.

\[3\] Powell, William C ,Hicks,et al.A new rabbit monoclonal antibody (4B5) for the immunohistochemical (IHC) determination of the HER2 status in breast cancer: comparison with CB11, fluorescence in situ hybridization (FISH), and interlaboratory reproducibility.\[J\].Appl Immunohistochem Mol Morphol, 2008,15(5):510-1. DOI:10.1097/PAI.0b013e31802ced25.

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